新葡萄8883官網(wǎng)AMG提供了一種高效的3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化方案，能夠?yàn)檠芯恐炯?xì)胞分化、代謝及相關(guān)代謝性疾病（如肥胖和糖尿病）的機(jī)制提供強(qiáng)有力的支持。3T3-L1細(xì)胞系最早于1974年由Green和Kehinde等人從小鼠胚胎成纖維細(xì)胞分離而成，因其能在體外有效分化為脂肪樣細(xì)胞，因此被廣泛應(yīng)用于相關(guān)科學(xué)研究。
誘導(dǎo)分化的效果可以通過多種方法檢測，其中油紅O染色法是一種經(jīng)典且直觀的方式。油紅O是一種脂溶性染料，專門用于與細(xì)胞內(nèi)的中性脂質(zhì)結(jié)合，并形成紅色脂滴。在顯微鏡下觀察脂滴數(shù)量和大小的增加可以表明誘導(dǎo)分化的成功。此外，通過檢測脂肪細(xì)胞特異性基因（如PPARγ、aP2及LPL）的表達(dá)水平，也可評估細(xì)胞的分化程度，常用的技術(shù)包括Western Blot。
實(shí)驗(yàn)方案概述
第一階段：細(xì)胞培養(yǎng)
1. 將細(xì)胞以每平方厘米3×103的密度接種于六孔板中，注意均勻鋪板，以確保分化效果。這一過程建議使用早代次的細(xì)胞，避免不均勻分化和細(xì)胞漂浮。
2. 用DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，加入10%小牛血清或胎牛血清，待細(xì)胞匯合度達(dá)到約70%時(shí)更換培養(yǎng)基，并在37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)至約90%的匯合度。切記，分化前匯合度不應(yīng)超過70%，以減少細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。
第二階段：分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制
1. 在無菌條件下，配置MDI誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基和胰島素培養(yǎng)基。此步驟需在培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行，確保所有操作均符合無菌要求。
2. 配置100 mL的MDI誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基時(shí)，需要新鮮制備IBMX（50 mM）和地塞米松（1 mM）的儲備溶液。胰島素需根據(jù)制造商說明復(fù)溶，并加入DMEM中直到最終濃度達(dá)到10 μg/mL。
第三階段：3T3-L1細(xì)胞向脂肪樣細(xì)胞的分化
1. 從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)板，去除DMEM培養(yǎng)基，并在每孔加入2-3 mL的MDI誘導(dǎo)培養(yǎng)基，標(biāo)記為第0天。加入誘導(dǎo)劑時(shí)，手法要輕柔，以避免沖擊導(dǎo)致細(xì)胞漂浮。
2. 在第3天，去除MDI誘導(dǎo)培養(yǎng)基，并加入2-3 mL的胰島素培養(yǎng)基替換；第6天更換為新鮮的DMEM培養(yǎng)基。一般在第7-10天可獲得完全分化的脂肪樣細(xì)胞。
3. 分化效果的檢測可以通過油紅O染色進(jìn)行，以監(jiān)測脂質(zhì)的累積，或檢測脂肪細(xì)胞特異性標(biāo)志物（如脂聯(lián)素和FABP4）的表達(dá)，進(jìn)一步評估分化效果。
通過新葡萄8883官網(wǎng)AMG的方案，研究人員可以準(zhǔn)確高效地研究脂肪細(xì)胞的分化過程，為未來的相關(guān)疾病研究奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
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