新葡萄8883官網(wǎng)AMG在生物醫(yī)療領域中，病毒感染預實驗是一項重要的研究步驟。本實驗以24孔培養(yǎng)板為例，旨在對目的細胞和工具細胞進行感染預實驗。工具細胞可選用293T（人胚腎上皮細胞）、H1299（人肺癌細胞）或其他合適的細胞類型。實驗所需材料包括：培養(yǎng)基、24孔培養(yǎng)板、移液槍、槍頭、EP管、細胞計數(shù)板、冰盒及廢液缸等。根據(jù)所選目的細胞的特性，可以適量使用Polybrene以提高感染效率。
Day 1：首先，準備細胞。將細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期，并利用胰酶消化后計數(shù)。根據(jù)細胞計數(shù)測定細胞密度，每孔接種5×104個細胞，并添加500μL細胞培養(yǎng)液。在一般情況下，H1299或293T細胞在感染后第3天可達到80%-90%融合度。在接種目的細胞時，請根據(jù)其生長速度調(diào)整接種量，以確保第3天同樣達到80%-90%融合度。
Day 2：接下來，準備慢病毒顆粒。首先計算所需的慢病毒顆粒量，取出凍存在-80℃的病毒顆粒，進行冰浴融化。隨后，觀察培養(yǎng)箱中的細胞狀態(tài)及融合度，若細胞情況良好，則開始實驗流程：
A. 小心吸去24孔板中的舊培養(yǎng)液，加入新的完全培養(yǎng)液；
B. 向細胞中加入計算好的慢病毒顆粒液，并輕輕以劃8字的方式在工作臺上混勻；
C. 混勻后，將細胞培養(yǎng)板放置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中過夜。
Day 3：經(jīng)過12-16小時的感染后，需更換培養(yǎng)液。將含慢病毒顆粒的培養(yǎng)液吸出，再向培養(yǎng)板中添加含5%滅活FBS（胎牛血清）的新培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。注意，目的細胞的感染時長需調(diào)整，部分細胞不宜感染超過12小時。
Day 4：繼續(xù)培養(yǎng)細胞，并觀察細胞狀態(tài)是否出現(xiàn)異常。
Day 5：對慢病毒顆粒的感染效率進行觀察與評估。將24孔培養(yǎng)板蓋好，使用70%乙醇清潔培養(yǎng)板外壁，之后在倒置熒光顯微鏡下觀察熒光表達，拍照并估計慢病毒顆粒對細胞的感染效率。如果慢病毒顆粒攜帶的基因表達所需時間較長，可建議在72或96小時后進行熒光觀察。根據(jù)熒光表現(xiàn)，可以初步探索出目的細胞的MOI值，為后續(xù)實驗奠定基礎。這一系列實驗均可借助新葡萄8883官網(wǎng)AMG的優(yōu)化系統(tǒng)進行，更加精確和高效。
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