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## 培養條件

細胞培養的條件至關重要，通常采用氣相配置為95%空氣和5%二氧化碳，溫度保持在37℃，培養基為MEM，加入10% FBS和1% P/S。這樣的環境能夠為細胞生長提供理想條件。

### 傳代方法

在細胞達到首次傳代時，建議使用1:2的比例進行分瓶培育。如果細胞匯合度未超過80%，則應將培養液收集至離心管中，并保留5ml的完全培養基再次培養。

### 細胞處理

收到細胞后，使用75%酒精噴灑于細胞瓶外，進行消毒后，放入超凈工作臺內進行無菌操作。然后，將細胞瓶置于37℃和5% CO2的培養箱中穩定3-4小時，隨后觀察細胞生長情況并進行拍照記錄（建議40x, 100x, 200x各一張），前三天的照片是重要的售后依據。

### 細胞培養步驟

細胞的傳代流程如下：首先，棄去培養上清，使用無鈣鎂磷酸鹽緩沖液（PBS）輕洗細胞1-2次。接著，加入約1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培養箱消化1-2分鐘，觀察細胞是否變圓并脫落，及時用完全培養基終止消化。隨后，輕輕吹打細胞，并將懸液轉移至離心管中，進行離心后重懸。

按1:2的比例將細胞懸液進行分瓶傳代，并補充新的培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培養箱中繼續培養。根據實際細胞狀態，傳代比例可為1:2至1:5。

### 細胞凍存

當細胞生長覆蓋整個培養瓶的80%時，棄去培養液后使用PBS清洗一次。添加0.25%胰蛋白酶，待細胞收縮后用完全培養基終止消化，再輕輕吹打細胞脫落。將細胞懸液轉移至離心管進行離心后，加入無血清凍存液（雅吉生物，貨號：C7001）混勻，并將其直接放入-80℃的冰箱中保存。

### 細胞復蘇

取出細胞凍存管后，迅速置入37℃水浴中解凍，并用75%酒精消毒外壁。將解凍的細胞轉移至含5ml完全培養基的離心管中，進行離心后重懸，接種至T25培養瓶，并放于37℃、5% CO2的培養箱中培養，第二天換用新鮮培養基繼續培養。

### 注意事項

在運輸過程中，細胞可能因粘附不牢而脫落，這是正常現象。推薦將培養液收集至離心管進行處理，以便于后續培養。對于新葡萄8883官網AMG品牌的細胞培養產品，確保遵循上述步驟，為細胞提供最佳的生長環境，有助于提高實驗的成功率。