樹突狀細胞（DC細胞）和T細胞的相互作用在腫瘤治療中占據著重要地位。研究顯示，骨髓來源的DC細胞（BMDCs）能夠誘導產生CD103+CD8+組織駐留記憶T細胞亞型，從而增強生殖道局部腫瘤的控制效果。此外，半乳糖酸的阻斷進一步提升了BMDCs誘導抗原特異性CD8+T細胞增殖的能力。全轉錄組的基因表達分析表明，對BMDCs進行仿硅酸處理能夠誘導與T細胞活化、細胞粘附及細胞間相互作用相關的基因發生差異表達。細胞聚類測定與單細胞嗜性測量的結果顯示，糖基化減少的BMDC與CD8+T細胞之間形成了更強的嗜性相互作用。
在DC細胞完成抗原呈遞后，其如何在CD8+T細胞的激活和靶細胞的殺傷過程中發揮協作和調控功能，成為當前的研究熱點之一。此外，活化CD8+T細胞的記憶功能分群變化與其細胞內的乳酸化、棕櫚酸化等代謝過程的關聯，也是研究的關鍵主題。為了評估CD8+T細胞的殺傷功能，本期小E將提供DC細胞活化的CD8+T細胞培養與殺傷功能評估的解決方案。
實驗原理簡介
DC細胞被認為是已知的功能最強的抗原呈遞細胞（APC），它們能夠攝取消化外源抗原，并將其裝載于MHC分子中，進而呈遞給CD4+和CD8+T細胞以產生免疫反應。將DC細胞與CD8+T細胞共培養是模擬體內CD8+T細胞激活的最佳方法，因此成為CD8+T細胞相關研究中不可替代的模型制備方案。具體而言，當表達抗原肽-MHCⅠ復合物的DC細胞與CD8+T細胞共培養時，CD8+T細胞會通過其表面的T細胞受體（TCR）與DC細胞上的抗原肽-MHCⅠ復合物結合而被激活。活化后的CD8+T細胞（又稱為細胞毒性T細胞）能夠通過釋放溶解介質（如穿孔素和顆粒酶）來殺傷靶細胞，此外，它們還可以通過T細胞表面的Fas配體（FasL/CD95L）與靶細胞的Fas受體（CD95）結合，觸發Caspase-8的激活，從而直接啟動靶細胞的凋亡程序。
實驗結果展示
在DC細胞的體外培養與促成熟實驗中，流式細胞術檢測表明，經過促成熟培養后，C57小鼠骨髓細胞轉化為成熟DC細胞，MHCII、CD80、CD40及CD86的表達均顯著升高。同時，CD8+T細胞的分選按照EasySort?MouseCD8+TCellIsolationKit（貨號:MIM003N）從C57小鼠脾臟中分選，流式細胞術分析表明細胞的純度達標。使用滅活靶細胞（Raw2647）進行抗原裝載后，分選的CD8+T細胞與之共培養72小時后，CD8+T細胞的增殖情況也得到了顯著改善。
在CD8+T細胞殺傷靶細胞的凋亡檢測中，增殖后的T細胞與靶細胞（Raw2647）按1:10的比例共培養24小時，流式細胞術分析靶細胞（Raw2647）中Caspase3酶活性的變化顯示，相較于控制組，共培養組的Raw2647細胞Caspase3酶激活比例增加至7944%。ELISA檢測上清中IFN-γ、IL-2、TNF-α等細胞因子的表達，結果表明，共培養組的細胞因子水平明顯高于控制組。這些實驗充分驗證了DC細胞在CD8+T細胞活化及殺傷功能中的重要角色，表現出強大的生物醫學研究價值。
實驗方案及操作流程
DC細胞的體外培養與促成熟的操作流程為：取小鼠骨髓細胞，使用分化培養基培養6天后，換成成熟培養基培養24小時，以獲得成熟的DC細胞。詳細操作流程可參考“MouseBoneMarrow-derivedDendriticCells(BMDC)InductionandIdentificationKit”（貨號：XJM003）說明書。進一步處理中，使用80℃水浴加熱滅活Raw2647細胞4小時，并進行離心洗滌，重懸后進行計數。隨后，將滅活處理的Raw2647細胞與成熟的BMDC以1:1的比例共培養24小時，收集細胞并計數，準備后續實驗。
通過以上的實驗方案，能夠有效評估CD8+T細胞的殺傷功能，從而為腫瘤免疫治療提供新的思路與方法，提升新葡萄8883官網AMG的科研實力，推動生物醫學領域的發展。如需了解更多實驗細節與技術支持，歡迎聯系新葡萄8883官網AMG的技術團隊！
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