在進(jìn)行西方印跡（Western Blot, WB）實(shí)驗(yàn)時(shí)，科研人員最擔(dān)心的是什么呢？就是條帶模糊，數(shù)據(jù)崩潰，經(jīng)過一番檢查后發(fā)現(xiàn)問題竟然出在內(nèi)參上！簡單來說，內(nèi)參如同細(xì)胞內(nèi)的“穩(wěn)定打工人”，其表達(dá)量保持不變，負(fù)責(zé)幫助你精準(zhǔn)校正樣本量，消除誤差。沒有合適的內(nèi)參，半定量結(jié)果就像缺少秤砣的秤——一切都得依賴運(yùn)氣！
? 首先關(guān)注分子量——目的蛋白與內(nèi)參的分子量如果相差超過5kD，條帶就容易出現(xiàn)“情侶裝”重疊的現(xiàn)象，因此選擇合適的內(nèi)參至關(guān)重要。
? 其次檢查定位——核蛋白實(shí)驗(yàn)中還使用β-actin？要知道核內(nèi)根本沒有它！此時(shí)可以考慮使用PCNA（29kD）或Histone H3（17kD）作為內(nèi)參，這樣獲得的結(jié)果更可靠！
? 組織類型也有“脾氣”——在脂肪組織中，β-actin的表達(dá)量常常低得讓人心碎，此時(shí)建議直接使用GAPDH；而在肌肉樣本中，tubulin可能會(huì)出現(xiàn)問題，反而使用actin會(huì)更加穩(wěn)定。
對(duì)于同一種β-actin，N端抗體在心肌組織中可能直接失蹤，而C端抗體卻能夠顯示出穩(wěn)定的條帶。因此，購買抗體前，一定要仔細(xì)查閱抗原位點(diǎn)，避免“組織特異性”問題的出現(xiàn)。
根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)類型選擇合適的內(nèi)參非常重要：全細(xì)胞或胞漿樣本優(yōu)先考慮使用β-actin或GAPDH；核蛋白建議用PCNA或Histone H3；對(duì)于大型蛋白質(zhì)則可以選擇β-tubulin；而特殊樣本時(shí)，要先查閱相關(guān)文獻(xiàn)再進(jìn)行采購！選擇穩(wěn)妥的內(nèi)參是確保WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的關(guān)鍵！新葡萄8883官網(wǎng)AMG，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！
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