新葡萄8883官網(wǎng)AMG為您詳細(xì)解析ELISA實驗中動物血清封閉劑的作用原理及特性。
一、作用原理
機械填補與吸附覆蓋
動物血清中的蛋白質(zhì)通過物理吸附填充固相載體（如ELISA板）表面的空隙，阻礙后續(xù)抗體與空白位點的非特異性結(jié)合。同時，血清中的抗體會優(yōu)先與樣本中的Fc受體結(jié)合，以減少一抗和二抗產(chǎn)生的假陽性信號。
雙重封閉機制
1. 普通蛋白封閉：血清中的白蛋白等成分封閉未包被的疏水區(qū)域，這與BSA的作用相似。
2. Fc受體封閉：血清內(nèi)源性IgG能夠有效阻斷樣本中Fc受體與檢測抗體之間的非特異性結(jié)合。
二、核心特性
特性說明
1. 種屬匹配性：需確保與二抗來源一致（如二抗為羊抗兔，則選用羊血清），以避免交叉反應(yīng)。
2. 成分復(fù)雜性：含有多種蛋白（IgG、白蛋白等），封閉效果更全面，但可能引入干擾（如生物素酶系統(tǒng)禁用）。
3. 低毒性：優(yōu)質(zhì)血清經(jīng)過去補體處理，能夠減少對細(xì)胞或酶的抑制作用。
三、對比其他封閉劑
與BSA對比
- 優(yōu)勢：血清能夠封閉Fc受體，適合檢測含有高Fc受體的樣本（如組織勻漿）。
- 劣勢：成本較高，成分復(fù)雜可能導(dǎo)致背景信號波動。
與脫脂奶粉對比
血清不含奶粉中的生物素或磷酸酶，適用于更廣泛的檢測體系。
四、使用注意事項
濃度優(yōu)化
常用濃度為5%-10%，應(yīng)通過預(yù)實驗確定最佳的信噪比。
避免干擾
含疊氮鈉的血清不可用于HRP標(biāo)記系統(tǒng)，因為會抑制酶活性。此外，凍存血清應(yīng)避免反復(fù)凍融，以防止蛋白降解。
替代方案
對于對Fc受體敏感的實驗，可以考慮使用Fab片段的二抗進行封閉。
五、典型應(yīng)用場景
免疫組化/熒光應(yīng)用：優(yōu)先使用同源血清以降低背景噪音。
高Fc受體樣本檢測：如血液或脾臟組織等樣本的檢測。
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