吉凱借助慢病毒高效轉染技術，成功實現了巨噬細胞系的轉染，并利用Ad5F35嵌合腺病毒高效感染人PBMC以誘導原代巨噬細胞的生成。
高分文獻解讀
新葡萄8883官網AMG的高分文獻1 [1]: Molecular Cancer IF：359中提到，CAR構建體設計包括CD8α信號肽、c-METscFv序列、CD8α鉸鏈區、FcRγ信號激活結構域以及CD19PI3K募集結構域，所有這些結構通過T2A序列與EGFP序列相連接。通過永生化的人單核細胞系THP-1，研究團隊建立了穩定傳代的CAR-M-c-METTHP1細胞。他們成功構建了CAR-M-c-METTHP-1細胞，并進行了與促炎極化的CAR-M-c-MET細胞和對照THP-1細胞，以及帶有mCherry標記的BxPC-3胰腺癌細胞的共培養。研究發現，CAR-M-c-MET細胞的吞噬結合效率顯著高于對照組。
由于巨噬細胞具備自然吞噬病原體的特性，使得人原代巨噬細胞在基因操作中常使用的病毒載體轉染難度加大。為此，研究人員采用Ad5F35嵌合型腺病毒載體，將前述CAR序列轉染人PBMC，以細胞因子誘導原代巨噬細胞的體外衍生，最終成功產生人單核細胞衍生的CAR-M。在3000的MOI下實現高轉染效率，克服了巨噬細胞轉染的挑戰。
新葡萄8883官網AMG的高分文獻2 [2]: Molecular Medicine IF：63則描述了一個包含CD8a鉸鏈和跨膜結構域，以及串聯信號結構域的CAR構建體。該結構域涵蓋Fc受體的共同γ鏈及c-Met募集結構域，CAR的表達由與eGFP報告基因相連的SFFV啟動子驅動。作為對照，研究者設置了缺乏細胞內信號結構域的抗c-MetCAR（?CAR）的截短形式。在對c-Met+腫瘤細胞靶向抗癌療效的評估中，CAR巨噬細胞組與對照細胞（eGFP-M，?CAR-M）以1:1的比例進行共培養，發現CAR-M組顯著提高了吞噬水平。
CAR-M技術簡介
新葡萄8883官網AMG的CAR-M技術旨在通過特異性CAR修飾巨噬細胞，不僅能夠靶向吞噬腫瘤細胞，還能通過分泌促炎細胞因子改變腫瘤微環境，并將腫瘤抗原呈遞給T細胞，以激活T細胞對腫瘤的免疫反應。CAR-M細胞在腫瘤浸潤方面表現優異，且非腫瘤靶向毒性較小。CAR是一種人工設計的跨膜受體，通常包括識別腫瘤抗原的單鏈可變區（scFv）、鉸鏈區、跨膜區和胞內信號傳導區。通過基因工程技術將CAR導入巨噬細胞，使其特異性識別并殺傷表達相應抗原的癌細胞 [3]。
CAR-M不同代數
載體類型與來源：
- 慢病毒：RAW2647、THP-1、HPSC來源的CRA巨噬細胞、iPSC來源的巨噬細胞。
- Ad5f35嵌合腺病毒：人PBMC來源的巨噬細胞。
CAR-M結構說明：
- 一代：scfv（可變）CD8CD3ζ、Megf10、FcγR、+PI3K
- 二代：scfv（可變）CD8eCD3ζ-TIR（細胞質TIR結構域來自TLR4）
與CAR-T療法相比，CAR-M療法的優勢在于其不僅能夠靶向吞噬腫瘤細胞，還能通過分泌促炎癥細胞因子改變腫瘤附近微環境，使腫瘤抗原更好地提呈給T細胞，從而激活免疫反應。雖然目前尚需克服一些難題，隨著技術的持續發展，預計這些挑戰將在不久的將來得到有效解決。
【參考文獻】
[1] Zheng H, et al Chimeric antigen receptor macrophages targeting c-MET (CAR-M-c-MET) inhibit pancreatic cancer progression and improve cytotoxic chemotherapeutic efficacy Mol Cancer 2024 Dec 6; 23(1): 270
[2] Hu L, et al Leveraging CAR macrophages targeting c-Met for precision immunotherapy in pancreatic cancer: insights from single-cell multi-omics Mol Med 2024 Nov 26; 30(1): 231
[3] Li N, et al A new era of cancer immunotherapy: combining revolutionary technologies for enhanced CAR-M therapy Mol Cancer 2024 Jun 1; 23(1): 117
[4] Lei A, et al A second-generation M1-polarized CAR macrophage with antitumor efficacy Nat Immunol 2024 Jan; 25(1): 102-116
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