新葡萄8883官網AMG SNU-1033細胞培養指南
一、細胞培養條件
細胞名稱：SNU-1033
生長特性：貼壁生長
凍存條件：無血清凍存液（貨號：C7001）
培養體系：1640培養基 + 10% FBS + 1% 雙抗
傳代方法：建議第一次傳代比例1:2
備注：每兩天更換培養基，可以使用無菌離心管收集培養基以便于對比。如果對比培養效果不理想，建議直接選購我們的完全培養基。
二、細胞收到后的處理
收到細胞后，待培養至良好狀態后，應將細胞瓶裝滿完全培養液并嚴格封口。這是確保運輸細胞狀態良好的最佳方法。使用75%酒精噴灑整個細胞瓶進行消毒后，在超凈臺中進行無菌操作。隨后，將細胞瓶放入37℃、5% CO2的培養箱中靜置3-4小時，以穩定細胞狀態，并進行顯微鏡觀察，記錄細胞生長情況（建議拍攝40x、100x和200x的照片，以便售后驗證）。如在前三天未提供照片，則默認收到細胞狀態良好。
三、細胞培養步驟
a. 細胞傳代
當細胞匯合度未超過80%時，將培養液收集至離心管中，保留5ml完全培養基于37℃、5% CO2中培養。如果細胞密度超出80%，可進行傳代，具體步驟如下：
- 棄去培養上清，用不含鈣、鎂的PBS清洗細胞1-2次。
- 加入約1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培養箱中消化1-2分鐘，觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕輕敲擊培養瓶后添加5ml以上的完全培養基以終止消化。
- 輕輕吹打細胞，使其完全脫落后，吸出并轉移至15ml離心管中，在1000 RPM條件下離心5分鐘，隨后棄去上清，加入1-2ml完全培養基重懸。
- 按照1:2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），再補充新的完全培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的細胞培養箱中培養。
b. 細胞凍存
- 在細胞覆蓋培養瓶80%面積時，棄去培養液，用PBS清洗細胞一次。
- 加入約1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，觀察細胞回縮變圓后加入5ml完全培養基終止消化，輕輕吹打使細胞脫落，然后轉移至15ml離心管中，1000 RPM離心5分鐘。
- 棄上清，加入1ml的新葡萄8883官網AMG無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后轉移至凍存管中。
- 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱。如果后期需要轉入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小時以上。
c. 細胞復蘇
- 從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速置入37℃水浴中解凍，直至無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
- 將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養基的15ml離心管中，1000 RPM離心5分鐘。
- 棄去上清，重新加入5ml完全培養基重懸，接種至T25培養瓶，并放入37℃、5% CO2的細胞培養箱中。
- 第二天更換為新鮮的完全培養基繼續培養。
四、注意事項
細胞在運輸過程中可能會因貼壁不牢而發生脫落，這是正常現象。如脫落細胞較多，可收集培養液至離心管，1000 RPM離心5分鐘，收集上清作為過渡培養。沉淀后加入1-2ml胰酶輕輕處理，然后使用完全培養基終止消化。再離心后按上述步驟分瓶傳代及補充培養基。
五、售后條款
1）因細胞出現問題而需要重新發貨的情況及標準包括：
- 遇到運輸問題導致細胞丟失、瓶身破損、培養液嚴重漏液等情況，可申請重發；
- 細胞污染問題需在收到產品48小時內提供實驗結果，核實后重發；
- 常溫發貨的細胞在靜置24小時后，或干冰凍存細胞復蘇后24小時大多數細胞未存活（需提供清晰的細胞狀態照片），可重發；
- 細胞復蘇后或常溫發貨的細胞靜置4小時未開封，出現污染的，亦可重發；
- 細胞活性問題需于7天內提出，使用臺盼藍染色法鑒定，核實后予以重發；
- 收到細胞后第1、2、3天需拍照，若3天內未告知視為合格。4-7天內出現問題需提供前三天照片，并與技術人員溝通，由技術人員判定是否重發。
2）不予重發的情況包括：
- 客戶造成的細胞污染，不重發；
- 客戶不當操作致使細胞狀態不良，不重發；
- 非新葡萄8883官網AMG推薦的培養體系導致的細胞狀態問題，不重發；
- 若未提供細胞培養前3天的照片，亦不予重發；
- 細胞培養過程中經過其他處理的，不重發；
- 收到細胞2天內未告知問題的，不重發；
- 其他視具體情況而定。
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