新葡萄8883官網(wǎng)AMG研發(fā)的CIHGM-1細(xì)胞系采用溫度敏感型SV40大T抗原（tsA58）永生化技術(shù)建立，源自原代人腎小球系膜細(xì)胞。這一細(xì)胞系保留了系膜細(xì)胞特異性標(biāo)志物的表達(dá)，包括α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、血小板衍生生長(zhǎng)因子受體-β（PDGFR-β）、結(jié)蛋白（Desmin）及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（如纖維連接蛋白和IV型膠原），同時(shí)具備對(duì)血管緊張素II（AngII）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）的收縮及增殖反應(yīng)，是研究腎小球疾病機(jī)制的理想體外模型。
CIHGM-1細(xì)胞系通過(guò)溫度敏感型SV40大T抗原技術(shù)建立。在33°C的溫暖環(huán)境中，細(xì)胞快速增殖，而在37°C條件下，則可以誘導(dǎo)細(xì)胞分化并恢復(fù)其靜息表型。CIHGM-1細(xì)胞已廣泛用于糖尿病腎病機(jī)制研究、腎小球硬化模型構(gòu)建、細(xì)胞外基質(zhì)代謝調(diào)控分析以及炎癥因子介導(dǎo)的系膜損傷與腎臟纖維化藥物篩選等領(lǐng)域。
此細(xì)胞系的技術(shù)優(yōu)勢(shì)在于其可調(diào)控的雙向模型系統(tǒng)。在33°C條件下，可迅速增殖細(xì)胞數(shù)量；在37°C下，則模擬體內(nèi)的靜息或活化狀態(tài)。通過(guò)高葡萄糖（25mM）聯(lián)合TGF-β1（5ng/mL）刺激，可以構(gòu)建糖尿病腎病體外模型，該模型表現(xiàn)為細(xì)胞肥大、α-SMA表達(dá)上調(diào)及細(xì)胞外基質(zhì)的過(guò)度沉積（如纖維連接蛋白和IV型膠原的分泌增加）。利用AngII（100nM）處理可誘導(dǎo)系膜細(xì)胞的收縮反應(yīng)，適用于高血壓腎損傷機(jī)制的研究。
CIHGM-1細(xì)胞系還適用于研究Wnt/β-catenin信號(hào)通路在系膜細(xì)胞活化中的作用以及開(kāi)發(fā)抗纖維化藥物。細(xì)胞培養(yǎng)方面，推薦使用RPMI-1640培養(yǎng)基，添加10%胎牛血清、1%ITS（胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒）、10U/mL干擾素-γ（IFN-γ）以及2mM L-谷氨酰胺，在33°C的條件下進(jìn)行增殖培養(yǎng)。誘導(dǎo)分化時(shí)，待細(xì)胞融合達(dá)80%后更換為無(wú)血清培養(yǎng)基，于37°C非允許條件下培養(yǎng)7天以誘導(dǎo)細(xì)胞分化。
細(xì)胞傳代使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液進(jìn)行消化，消化時(shí)間控制在3-4分鐘，推薦傳代比例為1:3至1:4。通過(guò)高糖（25mM葡萄糖）聯(lián)合TGF-β1（5ng/mL）刺激7-14天，可以誘導(dǎo)基質(zhì)生成，構(gòu)建纖維化模型。建議定期通過(guò)免疫熒光檢測(cè)α-SMA和PDGFR-β的表達(dá)情況，并利用ELISA檢測(cè)纖維連接蛋白的分泌水平。
盡管CIHGM-1細(xì)胞系是永生化細(xì)胞系，但建議在P20代次以?xún)?nèi)使用；溫度轉(zhuǎn)換時(shí)需注意300-500小時(shí)的適應(yīng)期。在進(jìn)行細(xì)胞收縮實(shí)驗(yàn)時(shí)，建議使用膠原蛋白包被的培養(yǎng)板，并結(jié)合羥脯氨酸含量測(cè)定驗(yàn)證膠原的積累。所有的研究和實(shí)驗(yàn)應(yīng)在新葡萄8883官網(wǎng)AMG的指導(dǎo)和支持下進(jìn)行，以確保實(shí)驗(yàn)的成功與準(zhǔn)確性。
津公網(wǎng)安備 12011302120117